O Repositório Institucional da Universidade Federal Rural da Amazônia (RIUFRA) é um dispositivo de armazenamento e disseminação das obras intelectuais da UFRA, produzidas no âmbito das atividades de pesquisa, ensino e extensão da instituição. É composto de documentos em formato digital, provenientes das atividades desenvolvidas pelo corpo docente, discente e técnico-administrativo da UFRA e por obras elaboradas a partir de convênio ou colaboração entre a instituição e outros órgãos publicados em autoria e/ou coautoria.
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http://repositorio.ufra.edu.br/jspui/handle/123456789/2049| Title: | Screening de alterações na região hotspot do gene BRCA2 em tumores de mama caninos |
| Advisor: | BORGES, Bárbara do Nascimento |
| Authors: | REIS, Keitty Araujo dos |
| Keywords: | Cadela - tumor mamário BRCA2 Mutação genética Carcinogênese mamária Cadela - neoplasia mamária |
| Issue Date: | 2015 |
| Publisher: | UFRA - Campus Belém |
| Citation: | REIS, Keitty Araujo dos. Screening de alterações na região hotspot do gene BRCA2 em tumores de mama caninos. Orientador: BORGES, Bárbara do Nascimento. 2015. 71 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agropecuária) - Univesidade Federal Rural da Amazônia, 2015. Disponível em: http://repositorio.ufra.edu.br/jspui/handle/123456789/2049. Acesso em: |
| Resumo: | Os tumores mamários são neoplasias frequentes em fêmeas caninas. Representando 25 a 50% dos tumores caninos, e 50% destes são considerados malignos. São considerados especiais para os pesquisadores devido às similaridades com o câncer de mama humano. A identificação de fatores de risco genéticos é fundamental para a melhoria da prevenção, diagnóstico e tratamento. O principal fator genético envolvido na carcinogênese mamária é a alteração de genes supressores de tumor, incluindo o BRCA2. Quando mutado representa grande risco ao desenvolvimento de tumor de mama. Com isso, o presente estudo tem por objetivo identificar alterações na região hotspot do gene BRCA2 relacionadas com o desenvolvimento de tumores mamários caninos, com a análise dos éxons 11, 12, 24 e 27, que são os mais estudados na espécie canina, para esse gene e os quais apresentam alterações já descritas por literatura, a fim de identificar alterações gênicas em caninos que apresentam tumor mamário, correlacionando as alterações encontradas com os aspectos histopatológicos, e identificando possíveis marcadores do processo tumoral para a construção de kits de diagnóstico e prognóstico da doença. Foram utilizadas amostras, de tecido mamário neoplásico e não-neoplásico de caninos atendidos no HOVET/UFRA. As amostras foram armazenadas em microtubos com RNA Later® e conservadas a temperatura de -20 ºC. A extração do DNA foi feita pelo método de fenol-clorofórmio, e posteriormente realizada a PCR. A identificação das alterações foi realizada no programa BioEdit v.5.0.6, pelo alinhamento das sequências obtidas com os éxons correspondentes oriundas do GenBank. Para análise estatística foram utilizados os testes Qui-Quadrado, teste G, e Exato de Fisher, Odds Ratio através do programa GraphPad Prism 6.0. Foram utilizadas 40 amostras de 23 animais, dos quais apenas um era macho, faixa etária entre 4 a 15 anos, várias raças com a raça Poodle sendo a mais acometida depois dos cães sem raça definida, com histogênese tumoral do tipo sarcoma sendo mais frequente. Na análise das alterações encontradas foi observado que o éxon 11 apresentou o maior número de polimorfismos na região hotspot analisada: A 355G, CCC1954AAA, C2121A, A2414G e A511C; sendo que apenas a alteração A511C não foi correlacionada com aumento de risco de desenvolver tumores quando comparada com as características clínicas e histopatológicas dos pacientes. O éxon 12 apresentou um polimorfismo G/A (rs23255542), sendo que as frequências alélicas deste não estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg nos grupos tumorais e não tumorais analisados, e que a presença do alelo mutante em indivíduos que fizeram uso de anticoncepcional aumentou em 13 vezes o risco de desenvolvimento de tumores, sugerindo que esta alteração pode influenciar, mesmo sem causar mudança de aminoácido, na tumorigênese mamária canina. A única alteração observada no éxon 24 (A/G, posição 7747634) foi encontrada apenas em heterozigose em uma baixa frequência na população estudada, enquanto que o polimorfismo do tipo indel observado no éxon 27 (10204 ins/del AAA) apresentou frequências alélicas que não estão em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Este evento, apesar de ser observado em uma alta frequência na população estudada, não foi correlacionado com nenhuma característica clínica ou histopatológica analisada. Desta forma, pode-se sugerir que os polimorfismos dos éxons 11 e 12 apresentam potencial como biomarcadores da tumorigênese mamária canina na população estudada. |
| Abstract: | Breast tumors are common tumors in female dogs. Representing 25 to 50% of canine tumors, and 50% are considered malignant. They are considered special for researchers due to similarities to human breast cancer. The identification of genetic risk factors is crucial to improving the prevention, diagnosis and treatment. The main genetic factor involved in mammary carcinogenesis is the alteration of tumor suppressor genes, including BRCA2. When mutated is great risk to develop breast tumor. Thus, this study aims to identify changes in the BRCA2 gene hotspot region related to the development of canine mammary tumors, with the analysis of exons 11, 12, 24 and 27, which are the most studied in dogs, for that gene and which shows changes already described in literature in order to identify genetic alterations in dogs that have mammary tumor correlating the changes found with the histopathological features, and identify potential markers of tumor process for the construction of diagnostic kits and prognosis disease. Samples were used, of neoplastic breast tissue and non-neoplastic canine treated at HOVET / UFRA. The samples were stored in microtubes with RNA Later® and stored at -20 ° C. DNA extraction was performed with phenol-chloroform method, and then performed PCR. The identification of changes took place in BioEdit v.5.0.6 program, by aligning the sequences obtained with the corresponding exons derived from GenBank. Statistical analysis was performed using the chi-square test, G test and Fisher exact test, odds ratio by GraphPad Prism 6.0. 40 samples of 23 animals were used, of which only one was male, aged between 4-15 years, several races with the Poodle being the most affected after the mongrel dogs with tumor histogenesis sarcoma type is more frequent. In the analysis of the changes found it was observed that the exon 11 had the highest number of polymorphisms in the hotspot region analyzed: A355G, CCC1954AAA, C2121A, A2414G and A511C; and only the change A511C was not correlated with increased risk of developing tumors compared with the clinical and pathological characteristics of the patients. The exon 12 had a G / A polymorphism (rs23255542), and allele frequencies of this were not in Hardy-Weinberg equilibrium in tumor groups and non-tumor analyzed and that the presence of the mutant allele in individuals who used contraceptive increased 13 times the risk of developing tumors, suggesting that this alteration may influence even without causing amino acid change in canine mammary tumorigenesis. The only change observed in exon 24 (A / G, position 7,747,634) was found only in heterozygous at a low frequency in the population, while the polymorphism of indel type observed in exon 27 (10204 ins / del AAA) showed allelic frequencies They are not in Hardy-Weinberg equilibrium. This event, despite being observed at a high frequency in the population studied, was not correlated with any clinical or histopathological characteristics analyzed. Thus, it may be suggested that polymorphisms of exons 11:12 have potential as biomarkers of canine mammary tumorigenesis in this population. |
| URI: | http://repositorio.ufra.edu.br/jspui/handle/123456789/2049 |
| Appears in Collections: | Dissertações - Biotecnologia Aplicada à Agropecuária |
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