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http://repositorio.ufra.edu.br/jspui/handle/123456789/981| Título: | Congelação e vetrificação de espermatozóides epididimários de gato doméstico (Felis catus): estabelecimento de protocolos para felinos selvagens ameaçados de extinção. |
| Orientador: | DOMINGUES, Sheyla Farhayldes Souza |
| Autor(es): | LIMA, Silmara Letícia Gonçalves |
| Palavras-chave: | Gato doméstico - Criopreservação Epidídimo - Espermatozoides Felinos - Espermatozoides Gato doméstico - Espermatozoides |
| Data do documento: | 2020 |
| Editor: | UFRA/Campus Belém |
| Citação: | LIMA, Silmara Letícia Gonçalves. Congelação e vetrificação de espermatozóides epididimários de gato doméstico (Felis catus): estabelecimento de protocolos para felinos selvagens ameaçados de extinção. Orientadora: Drª Sheyla Farhayldes Souza Domingues. 2020. 77 f. Dissertação (Mestrado em Saúde e Produção Animal na Amazônia) - Universidade Federal Rural da Amazônia, Belém, 2020. |
| Resumo: | Objetivou-se investigar o efeito de diferentes osmolaridades do diluidor Tris-citrato acrescido de glicerol ou etilenoglicol na congelação de espermatozóides epididimários e realizar a vitrificação da cauda do epidídimo, para recuperação de espermatozoides viáveis de gatos domésticos (Felis catus). Dessa forma, o trabalho foi dividido em duas fases. Fase 1: Avaliou-se a manutenção dos parâmetros espermáticos em diluidor tris-citrato com osmolaridades 275, 325, 375, 425, 475 e 525mOsm, nos tempos (T0= 0, T1= 30 e T2= 60 min). E a congelação utilizando as osmolaridades 325 e 375 mOsm com glicerol a 4% ou etilenoglicol a 3%, 6% em espermatozoides da cauda do epidídimo de gatos domésticos. Fase 2: Desenvolver um protocolo de vitrificação da cauda do epidídimo de gatos domésticos para a recuperação de espermatozoides viáiveis, utilizando glicerol e etilenoglicol a 40% associados a sacarose a 0,1M, utilizando a de vitrificação de equilíbrio com a técnica de vitrificação em superfície sólida (SSV). Na Fase 1, dentre as osmolaridades, a motilidade da 325 mOsm não diferiu estatísticamente com o fluido epidídimal (controle a fresco) nos três tempos e a 375 mOsm no T0 e T1, e ambas não apresentaram diferenças estatísticas entre si e entre os tempos em todos os parâmetros espermáticos. O uso de 4% de glicerol em diluidor com 375 mOsm foi superior, apresentando motilidade de 25% ± 6, vigor 4, integridade de membrana plasmática de 48% ± 9 após a congelação, não apresentou diferenças estatísticas com a etapa de resfriamento e na morfologia não foram encontradas diferenças estatísticas entre as duas osmolaridades em todas as etapas da congelação. Na Fase 2, o tratamento com etilenoglicol teve melhores resultados para todos os parâmetros de motilidade espermática (Motilidade, Vigor, CASA) comparados para glicerol (P ˂ 0,05). Não houve diferenças estatísticas nos parâmetros de integridade de membrana plasmática e do acrossoma (Azul de tripan e Giemsa), integridade de membrana plasmática utilizando também (corantes fluorescentes Hoechst e Iodeto de propídio) e na morfologia normal dos espermatozoides antes e depois da vitrificação entre os grupos experimentais. Os resultados do presente estudo mostraram que o Tris-citrato com 325 e 375 mOsm entre as osmolaridades testadas e pós congelação com 375 mOsm e glicerol 4% manteve os parâmetros espermáticos, e foi obtido sucesso na vitrificação da cauda do epidídimo com etilenoglicol a 40% associado com sacarose (0,1 M), em espermatozoides epididimários de gatos domésticos. |
| Abstract: | The objective of this study was to investigate the effect of different osmolarities of the Tris-citrate thinner plus glycerol or ethylene glycol on the freezing of epididymal sperm and to vitrify the tail of the epididymis, to recover viable sperm from domestic cats (Felis catus). Thus, the work was divided into two phases. Phase 1: The maintenance of sperm parameters in a tris-citrate thinner with osmolarities 275, 325, 375, 425, 475 and 525mOsm was evaluated, at times (T0 = 0, T1 = 30 and T2 = 60 min). And freezing using osmolarities 325 and 375 mOsm with 4% glycerol or 3% ethylene glycol, 6% in sperm from the tail of the domestic cat's epididymis. Phase 2: Develop a protocol for vitrification of the tail of the epididymis of domestic cats for the recovery of viable sperm, using glycerol and ethylene glycol 40% associated with 0.1M sucrose, using that of equilibrium vitrification with the surface vitrification technique solid (SSV). In Phase 1 among osmolarities, the motility of 325 mOsm did not differ statistically with epididymal fluid (fresh control) in the three times and at 375 mOsm in T0 and T1, and both did not present statistical differences between themselves and between times in all parameters spermatic. The use of 4% glycerol in a diluter with 375 mOsm was superior, showing motility of 25% ± 6, vigor 4, plasma membrane integrity of 48% ± 9 after freezing, did not show statistical differences with the cooling step and in morphology, no statistical differences were found between the two osmolarities in all stages of freezing. In Phase 2, Ethylene glycol treatment had better results for all sperm motility parameters (Motility, Vigor, CASA) compared to glycerol (P ˂ 0.05). There were no statistical differences in the parameters of plasma membrane and acrosome integrity (Trypan blue and Giemsa), plasma membrane integrity using also (fluorescent dyes Hoechst and propidium iodide) and in normal sperm morphology before and after vitrification between the experimental. The results of the present study showed that Tris-citrate with 325 and 375 mOsm between the tested osmolarities and post-freeze with 375 mOsm and glycerol 4% maintained the sperm parameters, and was successful in vitrifying the tail of the epididymis with 40% ethylene glycol associated with sucrose (0.1 M), of epididymal sperm from domestic cats. |
| URI: | http://repositorio.ufra.edu.br/jspui/handle/123456789/981 |
| Aparece nas coleções: | Dissertações - Saúde e Produção Animal na Amazônia (Belém) |
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